척수수막류 환아에서 MTHFR(methylenetetrahydrofolate reductase) 유전자 내 677C→T 돌연변이 빈도에 대한 연구

• 영문명: The Prevalence of 677C→T Mutation in Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR) Gene in Spinal Neural Tube Defect The Prevalence of 677C→T Mutation in Methylenetetrahydrofolate Reductase (MTHFR) Gene in Spinal Neural Tube Defect
• 발행기관: 대한소아신경학회
• 저자명: 이백희(Baeck Hee Lee) 왕규창(Kyu Chang Wang) 정해일(Hae Il Cheong)
• 간행물 정보: 『Annals of Child Neurology(구 대한소아신경학회지)』대한소아신경학회지 제6권 제1호, 55~60쪽, 전체 6쪽
• 주제분류: 의약학 > 의학일반
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 1998.10.20

국문 초록

목 적 : 임신 4주전과 임신 첫 4주 동안 엽산의 공급으로 신경관 결손의 발생을 50%이상 예방할 수 있었다는 보고를 통해 엽산이 신경관 폐쇄에 중요한 역할을 한다는 것이 알려졌다. MTHFR은 엽산대사에 중요한 효소이다. MTHFR gene의 위치와 돌연변이가 밝혀짐에 따라 신경관 결손이 있는 환아와 그들 가족에서 MTHFR variant 빈도가 증가되어 있다는 보고들이 있었다. 본 실험은 MTHFR 유전자 내 677c-lT 돌연변이의 빈도를 측정하여 신경관 결손군에서 대조군에 비해 돌연변이의 빈도가 증가되었는지 알아보기 위해 시행하였다. 방 법 : 1997년 1월부터 1997년 12월까지 서울대학교 어린이병원과 단국대학교 소아과에서 신경관 결손(척수수막류)으로 진단 받고 추적 관찰중인 환아 21명과 환아부모 40명, 형제자매 7명을 대상으로 하였으며, 대조군으로 정상아를 1회 이상 분만한 경험이 있는 연령 25세부터 50세 사이의 성인 25명과 신경관 결손을 갖고 있지 않는 16세미만의 아동 18명을 대상으로 하였다. 혈액 채취는 EDTA tube에 전혈 4-5cc를 뽑아 gDNA를 추출하였다. 추출된 DNA를 template로 MTHFR 유전자 내 염기 서열 643부터 841 사이의 염기쌍을 증폭하였다. PCR은 통상의 방법으로 35 cycle시행하였다. PCR 산물은 butanol 추출 혹은 QIAquick spin column(Qiagen, CA, USA)을 이용하여 정제한 뒤 Hinfl로 처리하고 그 절단 결과를 8% polyacrylamide gel에서 전기영동 후 ethium bromide 염색으로 확인하였다. 결 과 : 대상 인원 총 111명 중 신경관 결손 가족군은 68명이었고 대조군은 43명이었다. 신경관 결손 가족군 중 환아의 어머니는 30명, 아버지 10명 환아는 21명이었고 자매 형제는 7명이었다. genotype에 따라 두 군을 비교하면 신경관 결손군 중 정상인 경우(-/-)는 32명으로 47.0%이고 heterozygote인 경우(+/-) 28명으로 41.2%이며 homozygote(+/+) 빈도수는 8명으로 11.8% 이었다. 대조군인 경우 정상은 11명으로 25.6%, heterozygote인 경우 25명으로 58.1%이며 homozygote인 경우는 7명으로 16.3%를 차지하였다(Table 1). 신경관 결손군에서 환아 21명 중 homozygote인 경우는 2명으로 9.5% 어머니는 30명 중 4명으로 13.3%, 아버지는 10명 중 1명으로 10%이며 형제 자매는 7명 중 1명으로 10.3%의 빈도를 보였다. 결 론: 1) 신경관 결손군에서 MTHFR variant polymorphism 의 빈도가 대조군에 비해 증가되어 있지 않았다. 돌연변이 빈도는 인종적 차이가 있을 수 있으나 정확한 결론을 얻기 위해 좀더 많은 대상이 참여되어야 할 것으로 생각된다. 2) Hyperhomocysteinemia를 일으킬 수 있는 MTHFR locus 이외의 또 다른 polymorphism과 MTHFR 이외에 homocysteine을 증가시킬 수 있는 엽산과 vitamin Bl2에 관련된 효소들에 대한 연구를 계속하여야 할 것으로 사료된다.

영문 초록

Purpose : There is evidence that folic acid given before and during the first 4 weeks of pregnancy can prevent more than 50% of neural tube defect. It suggested that folic acid play a great role when a neural tube closes. Methylenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) is an important enzyme in folate metabolism. Since the gene locus and mutation of MTHFR were identified, increased frequency of MTHFR variant was reported in neural tube defect. We studied the frequency of the 677C→T mutation in the MTHFR gene to determine whether this MTHFR gene variant is more common in persons with neural tube defect and their families compared to a control population. Methods : The study group consisted of 21 patients with meningomyelocele, 40 their parents and 7 siblings who were managed in Seoul National University College of Medicine and Dankook University Hospital during the period from Jan. 1997 to Dec. 1997. The control group consisted of 25 parents aged between 25 to 50 years who had given birth to, at least, one normal infant and 18 children under 16 years without neural tube defect. DNA was extracted from peripheral blood and a segment of the MTHFR gene was amplified using PCR technique. And treated with restriction enzyme, Hinfl. The restriction pattern was analyzed. Results : The frequency of the three genotypes were as follows: normal(-/-), 47.0% ; heterozygote (+/-), 41.2%; and homozygote(+/+), 11.8% in neural tube defect group and (-/-), 25.6%; (+/-), 58.1%; (+/+), 16.3% in control group. The MTHFR gene variant was present 9.5% of those with meningomyelocele, 13.3% of their mothers 10% of their fathers, and 10.3% of siblings. Conclusion : 1)There is no increase of the frequency of MTHFR variant polymorphism in neural tube defect compared to control group. These observations indicate that while there may be racial differences in the mutation frequency, expanded studies involving larger numbers of subjects are required. 2) To elucidate the role of various genetic factors influencing on homocysteine levels and vitamin nutrition, research on other genetic variants, such as folic acid and vitamin Bl2-related enzymes and receptors, are recommended.

키워드

Methylenehydrofolate reductase Neural tube defect 677C→T mutation