유전자증폭에 의한 식품 중 대장균군의 신속한 검출

• 영문명: Rapid detection of coliforms in foods by polymerase chain reaction
• 발행기관: 전남대학교 생활과학연구소
• 저자명: 전덕영(Deok-Young Jhon) 강어진(Eo-Jin Kang)
• 간행물 정보: 『生活科學硏究』生活科學硏究 第14輯, 85~98쪽, 전체 14쪽
• 주제분류: 자연과학 > 생활/식품과학
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 2004.12.30

국문 초록

식품에 오염된 분변오염의 지표가 되는 대장균군을 중합효소연쇄반응(PCR)을 이용하여 신속한 검사를 할 수 있는 방법을 개발하였다. 현재 사용되고 있는 대장균검사법은 유당부이온배지, BGLB배지 또는 데스옥시콜레이트 유당한천배지 등의 배지를 사용하여 미생물을 배양하는 방법으로서 신속한 결과를 얻을 수 없는 것이 단점이다. 유전자 증폭에 의한 방법은 빠르고 정확하며 다른 방법보다 오히려 경제적이다. 먼저 대장균 유전자 염기서열로부터 PCR에 필요한 시발물질 (primer)을 고안하고 대장균에 대하여 PCR을 수행하여 이를 우리나라의 대표적인 도시락인 김밥에서의 대장균 검사에 적용하였다. 유전자 증폭에 의하여 김밥으로부터 하루만에 대장균의 존재여부를 검사하는 방법은 다음과 같다: 유전자증폭기-Perkin-Elmer GeneAmp PCR system 2400, 유전자증폭용 튜브-PCR용 0.2㎖ 짜리 얇은 벽 튜브, 유전자 중합효소-Taq DNA polymerase, PCR primer-1차 PCR용 primer는 정방향의 것은 5’-GAT GGAGCATCAGGGCGGCTATACG-3’, 역방향의 것은 5’-CCCGTTGACTGCCTCTTCGCTGTAC-3’을 사용하며 2차 PCR용의 정방향 primer는 5’-CATCGCAGCGTAATGCTCTACACCA-3’, 역방향 primer는 5’-TATCGAAT CCTTTGCCACGCAAGTC-3’을 사용, PCR반응의 조건은 predenaturation 94℃/5분, denaturation 94℃/15초, annealing 65℃/15초, extension 72℃/20초, post-extension 72℃/5분으로 PCR은 20회를 반복 수행토록 한다. 1차 및 2차 PCR산물의 크기는 각각 835 bp와 412 bp이었다. 이 방법은 식품이나 음용수는 물론 행주나 도마 등의 식품용기구의 위생검사에도 적용이 가능하다.

영문 초록

Current Korean official detection methods for E. coli and coliforms are based on the cultivation of microorganisms in a medium of lactose-bouillon, BGLB, or desoxycholate-lactose agar. While the conventional methods are time-consuming and laborious, polymerase chain reaction (PCR) technique is rapid, accurate, and economical. The purpose of this study is to develop a rapid detection method for coliforms, fecal indicator organisms, in food using PCR. The developed E. coli detection method from Kim-bab, a typical Korean lunch box, using PCR reaction as follows: Perkin-Elmer GeneAmp PCR system 2400. 0.2 ㎖ thin wall-PCR tube, Taq DNA-polymerase, forward primer - 5’-GATGGAGCATCAGGGCGGCTATACG-3’, reverse primer- 5’-CCCGTTGACTGCCTCTTCGCTGTAC-3’, forward primer for secondary PCR-5’-CATCGCAGCGTAATGCTCTACACCA-3’, reverse primer for secondary PCR - 5’-TATCGAATCCTTTGCCACGCAAGTC- 3’, reaction condition for PCR - pre-denaturation 94℃/5 min, denaturation 94℃/15 sec, annealing 65℃/15 sec, extension 72℃/20 sec, and post-extension 72℃/5 min with 20 cycles from denaturation to extension steps. This method can be applied to the safety inspection of food-handling tools such as dishcloth and chopping board as well as food and drinking water.

목차

Abstract

Ⅰ. 서론

Ⅱ. 실험재료 및 방법

Ⅲ. 결과

Ⅳ. 고찰

Ⅴ. 요약

감사의 글

참고문헌