Sandwich ELISA에 의한 vibrio vulnificus cytolysin의 검출

• 영문명: Detection of vibrio vulnificus cytolysin by sandwich ELISA
• 발행기관: 한국예방수의학회
• 저자명: 김병수(Byung Su Kim) 김명숙(Myeong Sook Kim) 김종석(Jong Suk Kim)
• 간행물 정보: 『Korean Journal of Veterinary Public Health』Vol.24, No.1, 1~8쪽, 전체 8쪽
• 주제분류: 의약학 > 면역학
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 2000.03.30

국문 초록

V. vulnificus cytolysin을 검출 하기 위한 Ezyme-Linked Immunosorbent Assay(ELI-SA)에 대한 연구에서 다음과 같은 결과를 얻었다. V. vulnificus 균 배양시 4시간에 cytolysin 활성이 최고치에 이른 후 급격히 소실되었다. 따라서 균 배양 4시간째 배양 상청액으로부터 ammonium sulfate 침전, DEAE cellulose chromatography 및 phenyl-Sepharose chromatography을 통하여 cytolysin를 순수하게 정제하였으며, 정제된 cytolysin 단백으로 닭과 토끼를 이용하여 cytolysin에 대한 monospecific polyclonal 항체를 조제하였다. Cytolysin에 대한 polyclonal 항체들은 immunoblotting 상에서 균 배양 상청액 단백들중 단지 cytolysin만 결합함으로 높은 항원 특이성을 갖고 있음을 알 수 있었다. 따라서 cytolysin에 대한 polyclonal 항체들은 cytolysin-Affi-Prep immunoaffinity chromatography을 실시하여 더욱더 정제됨으로써 sandwich ELISA의 capture 또는 detector 항체로 충분히 이용될 수 있었다. 본 연구에서 확립한 sandwich ELISA 법에서 V. vulnificus cytolysin의 검출 한계는 10 ng 이었고, 50 ng에서 포화에 도달하였다.

영문 초록

The sensitive Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the detection of vibrio vulnificus cytolysin was established. Cytolytic activity in V. vulnificus culture supernatant reached to the maximum about 4 hours and decreased rapidly afterwards. V. vulnificus cytolysin was purified from culture supernatants by ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose chromatography and phenyl-Sepharose chromatography. The polyclonal antibodies against the purified cytolysin were produced from chicken and rabbit. Resulting antibodies showed a high antigen-specificity for cytolysin, visualing a band of 51 kDa from the V. vulnificus culture supernatants on immunoblottings. Anti-cytolysin polyclonal rabbit and chicken antibodies were used as a capture or a detector antibody in sandwich ELISA after further purification by immunoaffinity chromatography. The limit of detection was 10 ng of V. vulnificus cytolysin, with saturation achieved at 50 ng.

목차

ABSTRACT

서론

재료 및 방법

결과

고찰

국문요약

참고문헌

키워드

Vibrio vulnificus cytolysin Hemolysin Sandwich ELISA