A Pre-embedding Technique of Nanogold-Silver Staining for Immunocytochemical Localization of Gp100 in Cultured Melanocytes

• 발행기관: 대한해부학회
• 저자명: 이승원(Seung-won Lee)
• 간행물 정보: 『대한해부학회지』제35권 제1호, 75~81쪽, 전체 7쪽
• 주제분류: 의약학 > 의학일반
• 파일형태: PDF
• 발행일자: 2002.02.28

국문 초록

Nanogold-silver 염색법은 전포매 면역조직화학적 기법으로 금 입자로 된 표지자로 세포 속 항원을 표지하여 전자현미 경수준에서 관찰하는 것이 가능하다. 이 기법은 금 기술(gold technology)의 발전과 은 강화(silver enhancement)의 개발에기반하고 있다. 본 연구에서는 고농도의 글루타르알데히드 (glutaraldehyde)와 금 토닝(gold toning)을 사용하는 Nanogoldsilver염색법을 이용하여 배양된 멜라닌 세포의 멜라닌소체에 있는 gp100단백질의 정위 (localization)를 시도하였다. Gp100단백질에 대한 항체인 HMB45를 일차항체로 그리고 biotinylated 이차항체, streptavidin-Nanogold 및 은 강화와 금 토닝을 사용하여 세포의 멜라닌소체에 금 입자로 특이성 높게 표지하였다. 이러한 표지의 특이성은 비교 실험을 통해 확인하였으며 구체적으로 일차항체를 제외한 대조 실험에서 비특이적 결합 또는 염색은 거의 없었다. 실제적으로 금 입자로 나타난 표지는 멜라닌소체의 가장자리 부위에 주로 분포하였다. 이러한 발견은 포매후 면역세포화학법과 같은 이전의 면역세포 화학적 연구에서는 밝히지 못한 것으로, gp100단백질의 멜라닌소체에서의 정위에 대해 형태학적으로 보다 구체적인 정보를 제공하고 있다.

영문 초록

Nanogold-silver staining is a pre-embedding immunocytochemical technique, making it possible to label antigens with particulate markers at the electron microscopic level. This technique is based on the advancement of gold technology and on the development of silver staining or enhancement. In the present study, the method of Nanogoldsilverstaining that includes the use of high concentration of glutaraldehyde and gold toning as well, was used to localize gp100 or a membrane bound antigen in melanosome of the cultured melanocytes. With the HMB45 antibody against gp100, biotinylated secondary antibody and streptavidin-nanogold followed by silver enhancement and gold toning led to highly specific labeling of gold particle over the melanosome compartments. The specificity of labelings obtained with this protocol was confirmed by the control experiment. Omission of the primary antibody led to very low background of labeling. The specific signal that appeared as a collection of gold particles was localized mainly to the peripheral part of melanosome. This finding provides the more detailed nature of gp100 localization in melanosome, which has not yet been shown by the previous immunocytochemical study such as the post-embedding immunoelectron microscopy.

키워드

Nanogold-silver staining Gold toning Gp100 Pre-embedding IEM 전포매 면역전자현미경법